期刊信息
主办:中国动物学会;中国科学院动物研究所
主管:中国科学院
ISSN:0250-3263
CN:11-1830/Q
语言:中文
周期:双月
影响因子:0.467105
数据库收录:
文摘杂志;北大核心期刊(1992版);北大核心期刊(1996版);北大核心期刊(2000版);北大核心期刊(2004版);北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);农业与生物科学研究中心文摘;化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2011-2012);中国科学引文数据库(2013-2014);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:生物学
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研究报告
红姜提取物保护早期膝骨关节炎模型大鼠的关节(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】红姜提取物的剂量分组及每组所需样本量参考ILIC等[9]的设计分为高、低剂量组用于探讨其抗炎活性,即把所有膝骨关节炎模型大鼠随机分为模型组、红姜
红姜提取物的剂量分组及每组所需样本量参考ILIC等[9]的设计分为高、低剂量组用于探讨其抗炎活性,即把所有膝骨关节炎模型大鼠随机分为模型组、红姜高剂量组、红姜低剂量组、阳性对照组,每组10 只大鼠。造模后所有大鼠跑步1 周,然后每组随机抽取1 只大鼠处死,取膝关节做组织切片,显微镜下观察关节软骨表面粗糙,个别可见裂隙,组织结构紊乱,软骨细胞弥漫增多,参照改良版Mankin 评分标准[12](详见表1),确定造模成功。其余大鼠进行实验干预。
表1 |Mankin 评分标准Table 1 |Mankin scoring criteria?
1.4.2 干预方法 灌胃用高、低剂量红姜提取物水溶液及塞来昔布胶囊水溶液配置质量浓度分别为20 g/L,10 g/L,4 g/L。确定造模成功当天即开始灌胃干预,临床药物根据《药理实验方法学》中的大鼠与人之间体表面积折算出大鼠的等效剂量[13],每周称质量1 次,灌胃量根据大鼠体质量重新计算。空白组不做任何处理;模型组每天予以体质量相关剂量生理盐水灌胃;红姜高剂量组予100 mg/kg 即5 mL/kg 的高剂量红姜提取物水溶液灌胃,红姜低剂量组予50 mg/kg 即5 mL/kg 的低剂量红姜提取物水溶液灌胃。阳性对照组大鼠折算后予18 mg/kg 即4.5 mL/kg 的塞来昔布胶囊水溶液灌胃(参考塞来昔布胶囊药品使用说明书,膝骨关节炎早期患者的成人推荐剂量为200 mg/d)。所有干预每日1 次。共持续4周。
1.4.3 取材及标本处理 末次干预结束后禁食不禁水24 h,使用10%水合氯醛溶液麻醉所有大鼠,对其进行腹主动脉采血。采血完毕后,使用颈椎脱臼法处死大鼠,屈曲右膝关节,使用剪刀剪开膝关节处皮肤,手术刀沿髌骨内侧从上至下打开关节囊并去除髌骨,剪刀等小心剥离胫骨平台周围韧带等软组织,使软骨暴露,使用骨剪轻轻取下右膝胫骨平台表面软骨置于2 mL 冻存管中,-80 ℃保存备用;分离左膝关节软组织并暴露胫骨平台软骨后,咬骨钳于胫骨约1/2 处咬断胫骨,附带关节软骨的胫骨整个置于装有40 g/L 多聚甲醛的离心管中固定,以便随后石蜡标本的制作。
1.4.4 番红O-固绿染色 40 g/L 多聚甲醛固定的标本脱钙并制备石蜡切片后常规脱蜡至水,将切片浸没于固绿染色液中3-5 min,取出切片弱酸溶液快速洗涤约15 s以去除多余染色,浸于番红染色液中3-5 min,体积分数95%乙醇和无水乙醇依次快速脱水,二甲苯透明5 min 并使用中性树胶封固。
1.4.5 ELISA 法检测血清细胞因子水平 将取材所得实验大鼠的腹主动脉血室温静置4 h 后离心并取上层血清,参照ELISA试剂盒说明书操作以检测白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α 水平。
1.4.6 荧光定量PCR 检测软骨中Col2α1 mRNA 表达 分别取50 mg 左右各组大鼠的软骨组织,使用Trizol 法提取总RNA,洗涤后无RNase 水溶解RNA,根据反转录试剂盒说明书进行反转录操作得到cDNA,将上述cDNA 模板与缓冲液、dNTP、引物、Taq DNA 聚合酶等离心混匀于EP 管构建反应体系,于PCR 仪器上进行扩增。采用2-??Ct法计算Col2α1 mRNA 的相对表达量。引物序列见表2。
表2 |PCR 引物序列Table 2 |PCR primer sequences基因 引物序列 片段长度(bp)Col2α1 Forward:5’-CAT CGA GTA CCG ATC ACA GAA G-3’ 101 Reverse:5’-GCC CTA TGT CCA CAC CAA AT-3’GAPDH Forward:5’-GCA AGG ATA CTG AGA GCA AGA G-3’ 98 Reverse:5’-GGA TGG AAT TGT GAG GGA GAT G-3’
1.5 主要观察指标①大鼠软骨番红固绿染色及Mankin 评分;②血清白细胞介素1β、白细胞介素6 和肿瘤坏死因子α水平;③软骨Col2α1 mRNA 表达水平。
1.6 统计学分析使用SPSS 26.0 软件进行统计学处理,计量资料以±s表示,GraphPad Prism 8 软件进行图表绘制,多组间均数比较采用单因素方差分析(方差齐,则使用LSD 法;方差不齐,则使用Dunnett’s T3 法),P< 0.05 则认为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠50 只,分为5 组,最终每组9 只共45 只大鼠相关数据纳入统计学分析。
2.2 软骨组织学观察番红O-固绿染色切片见图1。空白组软骨表面光滑无裂隙,组织结构清晰,各层软骨细胞排列规律整齐,细胞形态正常,软骨基质染色基本均匀;模型组可见软骨表面撕裂,组织结构紊乱,软骨细胞排列紊乱,形态发生改变,局部出现成簇现象,软骨基质染色明显减轻;红姜低剂量组软骨表面粗糙,可见轻微撕裂,表层软骨细胞减少,表层、辐射层、移行层、软骨基质染色均有不同程度减轻;红姜高剂量组表面粗糙,但未见裂隙,软骨细胞排列稍紊乱,软骨基质染色较轻,但流失程度轻于红姜低剂量组和模型组;阳性对照组软骨表面光滑未见明显裂隙缺损,组织结构相对完整清晰,软骨细胞略为增多,排列较为整齐,可见移行层软骨基质染色较轻。
文章来源:《动物学杂志》 网址: http://www.dwxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0611/627.html
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